| 三鹿集团三聚氰胺中毒事件发生后，回顾文献发现中国检验检疫科学院动植物检疫研究所的专家近期专门研究了三聚氰胺的细胞毒性实验、急性毒性、亚急性毒性实验和肾衰竭的作用。提示实验动物存在肾衰竭的可能，动物饲喂三聚氰胺后肾脏肾小管中出现了晶体。发现其慢性毒性作用较强。
研究原因始于2007年3月中旬以来,美国发生4 000多起猫、狗等宠物中毒死亡事件。美国食品药品管理局从进口的部分小麦蛋白粉和大米蛋白粉中检出三聚氰胺等成分。三聚氰胺多用于生产塑料和肥料,还可制造药物胶囊。在动物饲料中添加三聚氰胺,可提高饲料的氮含量,让人误以为该饲料的蛋白质比较丰富,但是否有害人体健康,有关它和其他物质混合后对动物产生何种影响的资料报道甚少。研究人员通过对三聚氰胺的细胞毒性、急性毒性和亚慢性毒性研究,客观评价动物长时间接触该化合物的危害性,以及为中毒动物的治疗提供理论基础。
1 材料选用BHK细胞(由中国人民解放军事医学科学院提供);昆明小鼠,清洁级 (购自中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心);成年健康猫(购自北京大学医学部实验动物中心)。 三聚氰胺(北京化学试剂公司),DMEM培养液, 胎牛血清(美国GIBCO公司),MTT溶液(美国Sigma公司),倒置相差显微镜(Dmil型,美国leica公司),酶标仪(Accent型,美国 Thermo公司),CO2培养箱(3111型,美国Thermo公司),生化分析仪(saba18意大利),石蜡切片机(Leica美国)。
2 科学家进行了如下实验：
三聚氰胺对BHK细胞的毒性试验:将三聚氰胺测量细胞活力存活率%=((样品A值 -空白组A值)/(阴性对照A值-空白组A值)×100%。发现高浓度可大量抑制细胞成活。三聚氰胺在高浓度时(≥1·667 mg/ml)与细胞存活率显著相关(P<0·05),计算IC50为10·11 mg/ml。
三聚氰胺的急性毒性试验:三聚氰胺灌胃方式从低剂量给药,每组6只小鼠(雌雄各半),观察48 h。小鼠死亡后剖解观察。最高剂量组给药后9 h,小鼠开始出现不安,呼吸急促,随后在几十min内死亡。其他剂量组小鼠仅见精神不振,反应迟钝,闭眼伏卧,不食等症状,随后在24~48 h出现个别死亡。灌胃死亡的小鼠输尿管中均有大量晶体蓄积,部分小鼠肾脏被膜有一层晶体。其他脏器未见有明显的变化。在猫肾小管官腔中出现晶体(↑)肾小管之间有淋巴细胞浸润。发现5g/kg时老鼠全部死亡。生化指标的变化 添加三聚氰胺后猫血清尿素。当饲料中添加三聚氰胺后,血清BUN和CRE逐渐升高,到23 d这两项指标超过正常范围(正常范围:BUN: 5·4~13·6mmol/L,CRE:62~190μmol/L)。组织病理学变化 猫在饲喂三聚氰胺30 d后,肾脏中可见淋巴细胞浸润,肾小管管腔中出现晶体。
厂商在植物蛋白粉中添加三聚氰胺的原因,是三聚氰胺物理性状为白色单斜晶体、无味,这与蛋白粉相仿,此物质易于购买和生产,成本很低,而三聚氰胺含氮量高才是最根本原因。蛋白质主要由氨基酸组成,其含氮量一般不超过30%,而三聚氰胺的分子式显示,其含氮量为66%左右。由于“凯氏定氮法”只能测出含氮量,并不能鉴定饲料中有无违规化学物质,所以,添加三聚氰胺的饲料理论上可以测出较高的蛋白质含量。国内已经有采用高效液相色谱法(HPLC)法检测饲料和工业品的三聚氰胺的含量,该方法更为灵敏,简单。三聚氰胺的全部不致死的最大剂量5 000 mg/kg。参考国家药物急性毒性分级标准,LD50>5 000 mg/kg,可以初步认定为微毒或基本无毒。三聚氰胺的亚慢性毒性试验结果显示,实验组和对照组血常规检测正常,实验组的血清BUN和CRE升高,且在第 23天,这两项指标超过正常范围,而BUN和CRE两项指标的升高在临床上提示实验动物存在肾衰竭的可能。并且动物饲喂三聚氰胺后肾脏肾小管中出现了晶体。由此推断三聚氰胺长期饲喂可能引起肾衰竭,其损伤机制还需要进一步研究。 |
