摘要：本试验研究了88株自雏鸡肠道分离出的乳酸菌的产酸能力，以及对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌的抑菌效果。研究表明，乳酸菌的产酸能力确实对其抑菌能力有一定影响。本次共从88株乳酸菌中筛选出了7株对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌均有较好抑制作用，4株对大肠杆菌有显著抑制作用，但对沙门氏菌抑制能力一般的乳酸菌，这11株菌均有较好产酸能力。　　
      20世纪40年代以来，在畜牧业生产中，抗生素有着广泛的应用，尤其在畜禽疾病防治方面，起到了巨大作用。但近年来，人们越来越重视到滥用饲用抗生素的弊端。抗生素替代品的研发已势在必行[1]，微生态制剂安全环保、无残留、无毒副作用，成为饲用抗生素的最佳替代品。乳酸菌制剂是其中效果较好的一种，在饲料工业中得到了广泛应用[2.3]。

　　在畜禽肠道中生存着大量的微生物，据估计，胃肠道内大约有1014的微生物[4]，一些共生微生物可帮助不易消化的营养物质的吸收利用，一些能分泌抗菌物质，阻止病原微生物过度繁殖和定植。这些微生物菌群的稳定与否直接关系到畜禽的健康和生长[5]。乳酸菌作为畜禽肠道中常见的有益优势菌群，可以提高饲料转化率，促进动物增重，并减少动物发病率[6.7]。本研究通过分析88株乳酸菌的产酸能力及抑菌能力，初步筛选出有良好的应用前景的乳酸菌，以期在畜牧业生产中发挥作用。

　　1 材料与方法

　　1.1 材料

　　1.1.1 菌株

　　88株乳酸菌(R01-R88)：由好实沃生物研发中心从雏鸡肠道中分离得到。

　　1.1.2 指示菌

　　大肠杆菌D101.金黄色葡萄球菌E101.沙门氏菌F101：均由好实沃生物研发中心提供。

　　1.1.3 培养基

　　MRS培养基：葡萄糖20g;蛋白胨10g;牛肉膏10g;酵母膏5g;乙酸钠5g;磷酸氢二钾2g;柠檬酸氢二铵2g;硫酸镁0.58g;硫酸锰0.25g;吐温-80 1mL;1000mL蒸馏水。用1mol/L的氢氧化钠溶液调节pH至7.2.115℃灭菌30min。固体培养基在液体培养基的基础上加入1.6%的琼脂。

　　NA培养基：蛋白胨10g，牛肉膏3g;氯化钠5g;1000mL蒸馏水。用1mol/L的氢氧化钠溶液调节pH至7.2.121℃灭菌20min。

　　1.1.4 仪器和设备

　　PB-10型数字酸度计：德国赛多利斯科学仪器(北京)有限公司;HZC-250型恒温振荡培养箱：江苏省太仓市实验设备厂;HYG-A全温摇瓶柜：太仓市实验设备厂;超净工作台SW-CG-1FD：苏州安泰空气技术有限公司;YS100双目显微镜：日本Nikon公司。

　　1.2 方法

　　1.2.1 指示菌活化

　　取出甘油管保藏的三种指示菌(大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌)，以无菌操作在NA平板上分别划线分离纯化，于37℃培养24~48h。从平板上挑取单菌落，接种于50mL NA液体培养基中，37℃，180r/min震荡培养18~20h，得指示菌菌悬液。

　　1.2.2 产酸能力测定

　　无菌操作下，将88株乳酸菌在MRS平板上分离纯化，37℃培养48h以上。从平板上挑取单菌落，接种至50mLMRS液体培养基中，37℃，180r/min震荡培养20~22h，测定pH值，以判断乳酸菌产酸能力。

　　1.2.3 对指示菌抑菌效果测定

　　无菌操作下，将88株乳酸菌在MRS平板上分离纯化，37℃培养48h以上。选取划线均匀，菌体生长密集处，用打孔器作出菌饼。将制好的菌饼均匀放在薄MRS平板上，将病原菌菌悬液与冷却至45℃左右的NA固体培养基以1:9混合，摇匀后倾注至已放置好菌饼的薄MRS平板，37℃培养两天后，观察各菌株对致病菌的抑菌效果。

　　2 结果和分析

　　2.1 乳酸菌产酸能力

　　88株乳酸菌的产酸能力如表1所示，pH值范围在在4.55~5.42之间。其中：pH4.65以下(含)的有29株;pH4.66~4.85之间的有50株;pH4.85~5.00之间的有0株;pH5.0以上(含)的有9株(R02、R03、R09、R16、R56、R57、R59、R63、R87)。平均pH值为4.72.可以看出，除pH>5.0的9株菌外，剩余79株菌均有较好的产酸能力，且产酸能力较为平均。

　　表1 88株乳酸菌产酸试验结果

　　88株乳酸菌的产酸能力如表1所示，pH值范围在在4.55~5.42之间。其中：pH4.65以下(含)的有29株;pH4.66~4.85之间的有50株;pH4.85~5.00之间的有0株;pH5.0以上(含)的有9株(R02、R03、R09、R16、R56、R57、R59、R63、R87)。平均pH值为4.72.可以看出，除pH>5.0的9株菌外，剩余79株菌均有较好的产酸能力，且产酸能力较为平均。

　　2.2 对指示菌的抑菌效果

　　表2 88株乳酸菌对指示菌的抑制效果　　

　　注：表中，-表示无抑菌效果，+代表有抑制效果，+越多表示抑菌效果越好。

　　88株乳酸菌对三种指示菌的抑菌效果如表2所示，可以看出：R12、R13的抑菌效果最好，对三种指示菌均有较好的抑菌效果，且对F101的抑制效果尤为明显;R11、R65、R69、R70、R84对三种指示菌亦有较好的抑制效果;R45对D101、E101有较好的抑制效果，但对F101的抑菌能力较弱;R04、R43、R44对D101的抑制效果极为显著，但对E101、F101的抑菌能力较弱。此11株菌均有较好的抑菌能力，可以进行下一步研究使用。表3为11株菌的产酸能力对比。

　　表3 抑菌效果良好11株乳酸菌产酸能力对比

　　从表3种可以看出：抑菌效果较好的11株乳酸菌产酸能力也较好，除R45为4.84外，其余10株菌的pH值均在平均产酸能力4.72以下。

　　表4 9株产酸能力较差的乳酸菌抑菌效果对比

　　从表4种可以看出：产酸能力较差的9株菌，抑菌效果也并不理想。尤其是对D101.9株中有6株未表现出明显的抑制效果，剩余3株对D101的抑制效果也很微弱。

　　3 讨论

　　从本研究结果可以看出：乳酸菌的产酸能力对其抑制病原菌的能力有一定影响。乳酸菌产生的有机酸可有效降低动物肠道内的pH值，使肠道处于酸性环境，阻止大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌等病原菌在动物肠道内的定植，并抑制其生长，从而防治畜禽相应疾病的发生[8]。但本研究也有部分产酸能力很好的菌株抑菌效果也很差(如R47)，而产酸能力较差菌却对某种病原菌有很好的抑制效果(如R56对F101)，可见乳酸菌的抑菌作用并不是完全来源于其代谢过程中的有机酸。有报道表明，乳酸菌除有机酸外，还有其他代谢产物有抑菌作用，如过氧化氢、细菌素等[9]。

　　4 结论

　　研究表明乳酸菌对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌确实有抑制作用，且其代谢产生的有机酸对乳酸菌抑制病原菌的效果确有一定影响，但不同的乳酸菌对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌表现出不同的抑制效果。本研究共筛选出2株对三种病原菌均有良好抑制效果，对沙门氏菌抑制效果显著的乳酸菌;5株对三种病原菌均有良好抑制效果的乳酸菌，以及4株对大肠杆菌有显著抑制效果，但对沙门氏菌抑制效果一般的乳酸菌，着11株乳酸菌均有较好的产酸能力。后续还要对此11株菌的抗逆性、药敏性等进行研究，以进一步筛选优良菌株，在畜牧业生产中发挥效用。

　　参考文献：略