大豆制品中尿素酶活性测定方法

　　GB/T 8622-1988

　　1　适用范围

　　本标准适用于由大豆制得的产品和副产品中尿酶活性的测定。本法可确认大豆的湿热处理程度。

　　2　定义

　　本标准所指尿素酶活性定义如下：

　　在（30±0.5）℃和pH7的条件下，每分钟每克大豆制品分解尿素所释放的氨态氮的毫克数。

　　3　原理

　　将粉碎的大豆制品与中性尿素缓冲溶液混合，在30℃保持30min，尿素酶催化尿素水解产生氨的反应。用过量盐酸中和所产生的氨，再用氢氧化钠标准溶液回滴。

　　4　仪器设备

　　4.1　样品筛：孔径200?m；

　　4.2　酸度计：精度0.02pH，附有磁力搅拌器和滴定装置；

　　4.3　恒温水浴：可控温（30±0.5）℃；

　　4.4　试管：直径18mm，长150mm，有磨口塞子；

　　4.5　精密计时器；

　　4.6　粉碎机：粉碎时应不生强热（例如球磨机）

　　4.7　分析天平：感量0.0001g；

　　4.8　移液管：10mL。

　　5　试剂和溶液

　　5.1　尿素：分析纯；

　　5.2　磷酸氢二钠：分析纯；

　　5.3　磷酸二氢钾：分析纯；

　　5.4　尿素缓冲溶液（pH6.9至7.0）：4.45g磷酸氢二钠和3.40g磷酸二氢钾溶于水并稀释至1000mL，再将30g尿素溶在此缓冲溶液中，可保存1个月。

　　5.5　盐酸：分析纯，c（HCL）=0.1mol/L溶液；

　　5.6　氢氧化钠：分析纯，c（NaOH）=0.1mol/L标准溶液。

　　6　试样的制备

　　用粉碎机将10g试样粉碎，使之全部通过样品筛。对特殊试样（水分或挥发物含量较高而无法粉碎的产品）应先在实验室温度下进行预干燥，再进行粉碎，当计算结果时应将干燥失重计算在内。

　　7　测定步骤

　　称取约0.2g已粉碎的试样，称准至0.1mg，转入试管中（如活性很高只称0.05g试样）,移入10mL尿素缓冲溶液，立即盖好试管并剧烈摇动，马上置于（30±0.5）℃恒温水浴中，准确计时保持30min。即刻移入10mL盐酸溶液，迅速冷却到20℃。将试管内容物全部转入烧杯，用5mL水冲洗试管两次，立即用氢氧化钠标准溶液滴定至pH4.70。

　　另取试管作空白试验，移入10mL尿素缓冲液，10mL盐酸溶液。称取与上述试样量相当的试样，也称准至0.1mg，迅速加入此试管中。立即盖好试管并剧烈摇动。将试管置于（30±0.5）℃的恒温水浴，同样准确保持30min，冷却至20℃，将试管内容物全部转入烧杯，用5mL水冲洗试管两次，并用氢氧化钠标准溶液滴定至pH4.70。

　　8　测定结果的计算

　　8.1　计算方法

　　以每分钟每克大豆制品释放氮的毫克量表示的尿素酶活性U，按下式计算：

　　式中：

　　c ——氢氧化钠标准溶液浓度，mol/L；

　　V0 ——空白试验消耗氢氧化钠溶液体积，mL；

　　V ——测定试样消耗氢氧化钠溶液体积，mL；

　　m ——试样质量，g。

　　注：若试样经粉碎前的预干燥处理时，则

　　式中：

　　S——预干燥时试样失重的百分率。

　　8.2　重复性

　　同一分析人员用相同方法，同时或连续两次测定结果之差不超过平均值的10%，以其算术平均值报告结果。