摘要：对试验小鼠饲喂1‰和3‰抗菌肽饲料添加剂，鸡红细胞吞噬实验检测小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能，研究抗菌肽饲料添加剂对小鼠免疫功能的影响。结果：抗菌肽饲料添加剂可以显著提高小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬率和吞噬指数，增强小鼠非特异性免疫功能。

　　关键词：抗菌肽饲料添加剂;先天性免疫;小鼠

　　Influence of antimicrobial peptides feed additive on the phagocytic function of macrophage in mice

　　WANG Kai1, LUO Jiedong 1, ZHOU Hongbo2,PI Canhui2,PENG Yonghe2,SU Xiangdong2,LI Yongxin2

　　(1. Foshan University, foshan, 528000, china; 2. Shenzhen Sunsmile Biotechnology Co., Ltd，Shenzhen，518057，China)

　　Abstract:To evaluate the immune function of microbial peptides feed additive, the tests of innate immune function were carried out. Results: After taking the antimicrobiol peptides feed additive, the phagocytic rate and phagocytic index of chicken red cell devoured by mouse abdominal phagocyte were heightened(P<0.01).Conclusion: antimicrobial peptides feed additive can greatly strengthen the phagocytic function of macrophage in mice , and potent improve the host innate immunity.

　　Key words: microbial peptides feed additive ;innate immunity; mouse

　　抗菌肽是生物在长期进化过程中为适应环境、求得生存而最早产生的免疫活性分子，是天然免疫的重要介质，在宿主对抗病原入侵的免疫防御中起着极其重要的作用，被形象地称为“天然抗菌剂”，也称“阳离子宿主防御肽”[1]。抗菌肽在体内除了能以直接杀死病原菌的方式起作用外，更多的时候是作为免疫效应分子来启动、调节宿主免疫防御体系：如充当单核细胞和T淋巴细胞的趋化因子，使它们能快速聚集在炎症反应部位;促进化学因子的表达和T辅助淋巴细胞的增殖反应;抑制细菌产物(如脂多糖、脂壁酸)诱导产生对宿主有害的细胞因子，避免内毒素血症的发生;促使巨噬细胞及激活的淋巴细胞的凋亡，也就是指具有潜在消灭感染细胞的功能等[2]。

　　本研究旨在通过研究抗菌肽饲料添加剂对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响以探索其对动物非特异性免疫功能的影响，为今后进一步推广使用抗菌肽，取代传统抗生素产品提供理论依据。

　　1材料和方法

　　1.1 试验材料

　　抗菌肽饲料添加剂由深圳圣西马生物技术有限公司提供，商品名称为肽轻松。

　　1.2试验动物分组

　　6～8周龄健康小鼠60只，雌雄兼用，体重18～22g，随机分为三组，每组20只(一组对照，两个实验组)分笼饲养，自由饮水和进食。对照组饲喂全价营养饲料，实验组1饲喂全价营养饲料+1%抗菌肽饲料添加剂;实验组2饲喂全价营养饲料+3%抗菌肽饲料添加剂。

　　1.3非特异性免疫功能检测：小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞功能试验(半体内法)

　　饲喂第20天，每只小白鼠腹腔注射加热至澄清的6%淀粉溶液1ml。24小时后，再次注射1ml淀粉溶液。间隔2h，每鼠腹腔注射1%的鸡红细胞悬液1ml。间隔2h，颈椎脱臼处死，仰位固定于平板上。剖开腹腔，抽取腹腔液滴片，制作临时装片，瑞氏染液染色。油镜下计数100个巨噬细胞中吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数和吞噬的鸡红细胞总数，计算吞噬百分率和吞噬指数[3]。

　　吞噬百分率(%)=100个巨噬细胞中吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/100个巨噬细胞×100%; 吞噬指数=100个巨噬细胞中吞噬的鸡红细胞总数/100个巨噬细胞。

　　1.4 统计方法

　　采用单因素方差分析，SPSS 11.5 软件进行统计。

　　2.试验结果

　　抗菌肽对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响，统计结果见表1。由表1中可见，两个剂量组与对照组比较，小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬率和吞噬指数均有增高，且差异极显著(P<0.01)。两个剂量组相比较，随着饲喂剂量的提高，小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬率和吞噬指数都相应提高。

　　表1抗菌肽对小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响effects of Antimicrobial peptides feed additive on phagocytosis of macrophage in mouse

　　表中数据为平均值±标准差(X±SD);Dates in the table indicated by Mean±SD.* P<0.05，** P<0.01

　　3.讨论

　　3.1抗菌肽饲料添加剂可提高小鼠巨噬细胞的吞噬能力

　　巨噬细胞主要参与动物机体的非特异性免疫反应，可以通过吞噬作用杀伤病原微生物和肿瘤细胞，还可释放一些细胞因子和效应分子来发挥多种生物学作用，是机体产生特异性免疫应答的基础和机体维持内环境稳定的重要因素。大多数抗原经巨噬细胞处理后，免疫原性会大大增强，从而刺激机体产生良好的免疫应答[4]。通过测定巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬率和吞噬指数可以反映其吞噬功能的强弱。本实验证实抗菌肽饲料添加剂能增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力，且吞噬能力随饲喂剂量的增加而提高。因此，抗菌肽饲料添加制剂具有增强小鼠非特异性免疫功能。这与已发表的报道结果一致：温刘发[5]等在2001通过试验证实抗菌肽饲料可以减轻断奶仔猪的腹泻，皮灿辉[6]等于2008年对母猪饲喂抗菌肽饲料添加剂，通过试剂盒检测瘟抗体水平，发现饲喂抗菌肽饲料添加剂的母猪其体内猪瘟抗体水平得到了有效的提高。

　　3.2抗菌肽作为抗生素替代物的市场应用前景

　　抗菌肽具有高效性(其半数致死浓度平均在几十微摩尔以内)、抗菌谱广、可供选择的范围广、靶菌株不易产生抗性突变等，从而避免了传统抗生素类药物对机体免疫系统的损害。抗菌肽作为畜禽饲料添加剂取代或部分取代目前饲喂动物所用的抗生素，减少抗生素对动物体的危害，已经显示出了较好的应用前景：

　　温刘发[7]等证实，将开发的抗菌肽饲料添加于断奶仔猪饲料中，可以减轻断奶仔猪的腹泻;陈晓生等人[8]在肉鸭饲料中添加液体的蚕抗菌肽A D-酵母制剂后，发现鸭的血清代谢激素活动和营养物质合成显著增强;黄永彤等[7]将抗菌肽应用于饲喂肉鸡，发现有促进生长和提高免疫力作用，且与中草药和抗生素组对比，均无显著性差异;王广军等[9]在南美白对虾养殖中研究抗菌肽的应用效果，证实在饲料中添加抗菌肽后在日生长速度、相对增重率、饲料系数、成活率和抗病力方面均有显著提高。

　　随着抗菌肽应用领域的不断拓展及其作用机理研究的不断深入发展，抗菌肽与人类生活的关系也将越来越密切，抗菌肽的市场开发和应用前景必将更为广阔。