断奶仔猪日粮添加人工甜味剂提高钠/葡萄糖共转运载体的表达-中国饲料行业信息网-立足饲料，服务畜牧

　　2 结果

　　2.1 免疫荧光检测以及共定位猪小肠中T1R2，T1R3，味导素和葡萄糖-敏感型肠道激素

　　图1. 沿着猪小肠隐窝－绒毛轴的T1R1，T1R2，味导素的GTP结合蛋白α亚基（Gαgust）和嗜铬粒蛋白A的检测和定位。

　　使用仔猪小肠中段组织的连续冰冻切片检测：（a）T1R2（绿色）及T1R3 （红色）；（b）T1R3（绿色）和Gαgust（红色）；（c）T1R2（绿色）和嗜铬粒蛋白（红色）；（d）Gαgust（绿色）和嗜铬粒蛋白（红色）。（a）-（c）图像放大倍数为200×，（d）图为400×，标尺代表10 μm。

　　利用免疫组化的方法证明甜味味觉受体蛋白的亚基，T1R2，T1R3和味导素的GTP结合蛋白α亚基（Gαgust）仅仅在沿着仔猪肠道隐窝－绒毛轴的细胞亚群表达（图1和2）。相反，SGLT1蛋白在沿着肠绒毛所有细胞（吸收功能的肠上皮细胞和内分泌功能的细胞）的网腔膜均有表达（图2）。T1R2,T1R3, Gαgust 和SGLT1在隐窝中的表达则可以忽略不计。为了探究T1R2，T1R3和 Gαgust三者的潜在共定位情况，对冰冻的小肠中段进行了连续切片（图1）。结果表明，所有的T1R3-表达细胞均能表达Gαgust （图1（b）），许多但并非所有的T1R3-表达细胞也有T1R2的表达T1R2（图1（c））。T1R2，T1R3和味导素一抗的隐现说明没有非特异的免疫反应活性（数据未显示）。能表达1型G-蛋白-耦合受体（T1R）和Gαgust 的细胞呈现出三角形或盘状形状，表明这些细胞属于肠内分泌谱系。连续切片的免疫组化结果表明肠内分泌细胞标记物嗜铬粒蛋白A的确与T1R 和Gαgust共表达（图1（c）and (d)）。然而，并非所有表达嗜铬粒蛋白A的细胞均能表达T1R 和Gαgust （图1（c）and (d)）。免疫检测方法也证明在仔猪小肠中，GIP，GLP-1，GLP-2和5－羟色胺在沿着隐窝－绒毛轴的上皮细胞亚系中均有表达（图3（a）- (g)）。沿小肠纵轴这些肠激素表达分布图为：GIP表达，小肠近段＞中段＞远段，GLP-1，GLP-2表达，远段＞中段＞近段（数据未展示。

　　为研究甜味受体亚单位和葡萄糖-敏感型肠激素之间的相关性，将冰冻小肠组织的近段，中段和远段进行连续切片分析。结果表明所有表达T1R2的细胞也表达GIP，GLP-1，GLP-2和5－羟色胺（图3（d）- (g)）。大多数表达T1R3的细胞也表达GLP-1，GLP-2和GIP（图3（a）- (c)）。和T1R和GLP-1，GLP-2和GIP共表达的细胞相比（10％），T1R和5－羟色胺共表达的细胞数目显着多一些，为50％。

　　图2. 沿着猪小肠隐窝－绒毛轴Na+/葡萄糖共转运蛋白1(SGLT1)和T1R2蛋白的表达。

　　免疫荧光图像显示T1R2（绿色）位于细胞亚群中，相反，SGLT1（红色）在沿着绒毛上皮细胞的腔膜中表达。图像放大倍数1000×。标尺代表10 μm。

　　甜味剂对肠道葡萄糖转运的作用

　　图3. 跨越猪小肠隐窝－绒毛轴的肠道激素和甜味味觉受体亚单位T1R2和T1R3的检测和定位。

　　小肠的近段（(a)和(d)）或中段（（b）,(c) 和(e)-(g)）组织的连续冰冻切片用免疫荧光法检测甜味受体亚单位，T1R2和T1R3，以及葡萄糖-敏感型肠激素。（a）-（c）T1R3（绿色）葡萄糖依赖型胰岛素样多肽（GIP），胰高血糖素样多肽（GLP）-1和GLP-2（红色）；（d）-（g）T1R2（绿色）GIP，GLP-1，GLP-2和5－羟色胺（红色）。图像（a），（d）和（e）放大倍数为200×，（b），（c）和（f）放大倍数400×。标尺代表10 μm。